EXTRAIT DE BELLADONE

Remplacer la monographie par le texte suivant :

« EXTRAIT DE BELLADONE (FEUILLE DE),

(FERME TITRE)

« Belladonnae folii extractum normatum

« Définition

« L'extrait ferme titré de feuille de belladone est obtenu à partir de feuille de belladone (221). Il contient au minimum 2,3 % et au maximum 2,7 % d'alcaloïdes totaux, exprimés en hyoscyamine (C17H23NO3 ; Mr 289,4), calculés par rapport à un extrait à 90 % de résidu sec.

« Production

« L'extrait ferme titré de feuille de belladone est préparé par lixiviation de 1 000 g de feuilles de belladone divisées avec la quantité suffisante d'alcool à 70 % V/V. Mettez à part les 1 000 premiers grammes de soluté et poursuivez l'extraction jusqu'à épuisement complet. Distillez le soluté restant sous pression réduite et à basse température et ajoutez la portion de liquide mis en réserve. Continuez la distillation jusqu'à élimination de l'alcool. Laissez reposer au frais un temps suffisant pour permettre la séparation des matières insolubles. Filtrez et concentrez le liquide, à basse température et sous pression réduite, jusqu'à consistance d'extrait ferme. Ajustez, si nécessaire, le titre en alcaloïdes totaux par addition de glucose.

« Caractères

« L'extrait ferme titré de belladone a une odeur vireuse. Il est hygroscopique et miscible à l'alcool à 70 % V/V.

« Identification

« A. - A 0,10 g d'extrait à examiner, ajoutez 3 ml d'acide chlorhydrique 0,1 M. Agitez avec 5 ml d'un mélange de 1 volume de chlorure de méthylène R et de 4 volumes d'éther R puis avec 2 ml du même mélange de solvants. Recueillez la couche aqueuse et ajoutez 1 ml d'ammoniaque diluée R 1. Agitez 3 fois avec 10 ml d'un mélange de 1 volume de chlorure de méthylène R et de 4 volumes d'éther R. Recueillez la couche organique et séchez-la sur du sulfate de sodium anhydre R. Filtrez dans une capsule de porcelaine, puis évaporez le solvant. Ajoutez 0,5 ml d'acide nitrique fumant R puis évaporez au bain-marie à siccité. Laissez refroidir ; ajoutez 10 ml d'acétone R puis, goutte à goutte, une solution d'hydroxyde de potassium R à 100 g/l dans du méthanol R. Il se développe une intense coloration violette.

« B. - Examinez les chromatogrammes obtenus dans l'essai "Atropine". Les bandes principales du chromatogramme obtenu avec la solution à examiner sont semblables quant à leur position et leur coloration aux bandes principales du chromatogramme obtenu avec la solution témoin.

« Essai

« Atropine. Opérez par chromatographie sur couche mince (2.2.27) en utilisant une plaque au gel de silice pour CCM R.

« Solution à examiner. A 0,20 g d'extrait à examiner, ajoutez 10,0 ml d'acide sulfurique 0,05 M, agitez pendant 2 minutes et filtrez. Ajoutez 1,0 ml d'ammoniaque concentrée R et agitez avec 2 fois 10 ml d'éther exempt de peroxydes R. Séparez par centrifugation si nécessaire. Réunissez les phases éthérées et séchez sur environ 2 g de sulfate de sodium anhydre R, puis filtrez et évaporez à siccité au bain-marie. Dissolvez le résidu dans 0,5 ml de méthanol R.

« Solution témoin. Dissolvez 50 mg de sulfate d'hyoscyamine R dans 9 ml de méthanol R. Dissolvez 15 mg de bromhydrate de scopolamine R dans 10 ml de méthanol R. Mélangez 1,8 ml de la solution de bromhydrate de scopolamine et 8 ml de la solution de sulfate d'hyoscyamine.

« Déposez séparément sur la plaque, en bandes, 20 ml de chaque solution. Développez sur un parcours de 10 cm avec un mélange de 3 volumes d'ammoniaque concentrée R, de 7 volumes d'eau R et de 90 volumes d'acétone R. Faites sécher la plaque à 100-105 oC pendant 15 minutes. Laissez refroidir et pulvérisez de la solution d'iodobismuthate de potassium R 2, jusqu'à obtention de bandes orangées ou brunes visibles sur fond jaune. Les bandes du chromatogramme obtenu avec la solution à examiner sont semblables à celles du chromatogramme obtenu avec la solution témoin quant à leur position (hyoscyamine dans le tiers inférieur et scopolamine dans le tiers supérieur) et leur coloration. Le chromatogramme obtenu avec la solution à examiner peut également présenter d'autres bandes faibles. Pulvérisez de la solution de nitrite de sodium R jusqu'à ce que la couche devienne transparente. Examinez après 15 minutes. Les bandes correspondant à l'hyoscyamine dans les chromatogrammes obtenus avec la solution à examiner et la solution témoin virent de l'orange au brun à brun-rouge, mais pas au bleu-gris (atropine).

« Résidu sec. Déterminé selon les indications données pour les extraits fermes dans la monographie EXTRAITS (765). Opérez avec 0,50 g d'extrait à examiner. Le résidu sec est de 75,0 % à 85,0 %.

« Dosage

« A chaque étape d'extraction, il est nécessaire de vérifier que les alcaloïdes ont été complètement extraits. Si l'extraction est dans la phase organique, évaporez à siccité quelques millilitres de la dernière phase organique, reprenez par l'acide sulfurique 0,25 M et vérifiez l'absence d'alcaloïdes avec la solution de tétraiodomercurate de potassium R. Si l'extraction est dans la phase aqueuse acide, utilisez quelques millilitres de la dernière phase aqueuse acide et vérifiez l'absence d'alcaloïdes avec la solution de tétraiodomercurate de potassium R.

« Dispersez 1,00 g d'extrait à examiner dans un mélange de 5 ml d'ammoniaque R et de 15 ml d'eau R. Agitez à 3 reprises au moins, chaque fois avec 40 ml d'un mélange de 1 volume de chlorure de méthylène R et de 3 volumes d'éther exempt de peroxydes R jusqu'à extraction complète des alcaloïdes. Réduisez le volume des phases organiques réunies à 50 ml environ par distillation au bain-marie, puis introduisez-les dans une ampoule à décantation en rinçant avec de l'éther exempt de peroxydes R. Au liquide obtenu, ajoutez 2,1 fois au moins son volume d'éther exempt de peroxydes R, de façon à obtenir une phase de densité nettement inférieure à celle de l'eau. Agitez la solution obtenue à 3 reprises au moins, chaque fois avec 20 ml d'acide sulfurique 0,25 M jusqu'à l'extraction complète des alcaloïdes. Séparez les phases par centrifugation si nécessaire, puis versez les solutions acides dans une deuxième ampoule à décantation.

« Alcalinisez par l'ammoniaque R les solutions acides et agitez à 3 reprises au moins, chaque fois avec 30 ml de chlorure de méthylène R jusqu'à extraction complète des alcaloïdes. Réunissez les phases organiques. Ajoutez 4 g de sulfate de sodium anhydre R et laissez en contact pendant 30 minutes en agitant de temps en temps. Décantez le chlorure de méthylène et lavez le sulfate de sodium avec 3 fois 10 ml de chlorure de méthylène R. Réunissez les phases organiques, évaporez au bain-marie à siccité et desséchez à l'étuve à 100-105 oC pendant 15 minutes. Dissolvez le résidu dans quelques millilitres de chlorure de méthylène R, évaporez au bain-marie à siccité et desséchez de nouveau le résidu à l'étuve à 100-105 oC pendant 15 minutes. Dissolvez le résidu dans quelques millilitres de chlorure de méthylène R. Ajoutez 20,0 ml d'acide sulfurique 0,01 M et éliminez le chlorure de méthylène par évaporation au bain-marie. Titrez l'excès d'acide par l'hydroxyde de sodium 0,02 M en présence d'indicateur mixte au rouge de méthyle R.

« Calculez la teneur % en alcaloïdes totaux, exprimés en hyoscyamine, à l'aide de l'expression :

52,092 x (20 - n)

rs x m

« n = volume d'hydroxyde de sodium 0,02 M utilisé, en millilitres ;

« m = masse de la prise d'essai, en grammes ;

« rs = résidu sec, exprimé en %.

« Conservation

« En récipient étanche, à l'abri de la lumière.

« Etiquetage

« L'étiquetage du produit est conforme aux prescriptions de la monographie EXTRAITS (765) pour les extraits fermes. »