PAULLINIA

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« GUARANA (GRAINE DE)

Paulliniae sorbilis semen

« Définition

« La partie utilisée de la graine de guarana est constituée par la graine soumise à une rapide dessiccation à chaud de Paullinia cupana Kunth ex H.B.K. var. sorbilis (Mart.) Ducke (= P. sorbilis C. Mart.). La graine de guarana contient au minimum 3,5 % de caféine (Mr 194,2), calculé par rapport à la drogue desséchée.

« Caractères

« Examinez au microscope la section transversale de la graine de guarana. Elle présente des téguments peu épais et un albumen abondant. Coloré par le réactif carmino-vert aluné R, le tégument externe est composé d'une cuticule lisse, brune, et d'une assise de cellules disposées en palissade, à parois régulièrement épaissies. Les assises sous-jacentes sont cellulosiques et plus ou moins aplaties. La zone correspondant au hile est constituée par des cellules scléreuses, à parois épaissies et canaliculées. Les cellules de l'albumen sont polyédriques, à parois cellulosiques, bourrées de grains d'amidon arrondis.

« La graine de guarana présente également les caractères macroscopiques et microscopiques décrits aux identifications A et B.

« Identification

« A. - La graine de guarana est plus ou moins sphérique, mesurant environ 12 mm de diamètre, glabre, luisante, marron foncé et portant une large tache plus claire au niveau du hile.

« B. - Réduisez la graine de guarana en poudre (355). La poudre est brun rougeâtre. Examinez au microscope dans le réactif lactique R. La poudre présente de nombreux grains d'amidon arrondis, des cellules de l'albumen à parois cellulosiques bourrées d'amidon, des cellules de l'épisperme à bords lobés et régulièrement épaissies, disposées en palissade en section transversale, des cellules scléreuses de forme plus ou moins polyédrique et à parois canaliculées.

« C. - Opérez par chromatographie sur couche mince (2.2.27) en utilisant une plaque au gel de silice gf254 pour CCM R.

« Solution à examiner. A 1,0 g de graine de guarana pulvérisée, ajoutez 10 ml d'alcool à 60 % V/V. Laissez macérer à 40 oC, en agitant continuellement pendant 15 minutes. Filtrez.

« Solution témoin (a). Solution de caféine R à 2,5g/l dans l'alcool à 60 % V/V.

« Solution témoin (b). Solution saturée de théobromine R à environ 5,0 g/l dans un mélange de 40 volumes d'alcool R et de 60 volumes de chlorure de méthylène R. Filtrez.

« Déposez séparément sur la plaque, en bandes, 20 ml de chacune des solutions. Développez sur un parcours de 10 cm avec un mélange de 5 volumes de méthanol R et de 95 volumes de chlorure de méthylène R. Laissez sécher la plaque à l'air pendant 5 minutes. Examinez en lumière ultraviolette à 254 nm. Le chromatogramme obtenu avec la solution à examiner présente deux bandes principales d'atténuation de fluorescence semblables quant à leur position respective aux bandes des chromatogrammes obtenus avec chacune des deux solutions témoins. Pulvérisez un mélange à volumes égaux d'acide chlorhydrique concentré R et d'alcool R. Pulvérisez ensuite une solution préparée extemporanément en dissolvant 1 g d'iode R et 1 g d'iodure de potassium R dans 100 ml d'alcool R. Le chromatogramme obtenu avec la solution à examiner présente deux bandes brun rougeâtre, l'une, nette et stable, semblable quant à sa position et sa coloration à la bande du chromatogramme obtenu avec la solution témoin (a) ; l'autre, de faible intensité et fugace, semblable quant à sa position et sa coloration à la bande du chromatogramme obtenu avec la solution témoin (b).

« Essai

« Eléments étrangers (2.8.2). La graine de guarana satisfait à l'essai des éléments étrangers.

« Perte à la dessiccation (2.2.32). Déterminée à l'étuve à 100-105 oC sur 1,000 g de graine de guarana pulvérisée, la perte à la dessiccation n'est pas supérieure à 10,0 %.

« Cendres totales (2.4.16). Le taux des cendres totales n'est pas supérieur à 4,0 %.

« Dosage

« Opérez par chromatographie liquide (2.2.29).

« Solution à examiner. A 1,00 g (m1) de graine de guarana pulvérisée (355), ajoutez 50 ml de méthanol R. Chauffez à reflux au bain-marie pendant 30 minutes. Laissez refroidir. Filtrez. Rincez le filtre avec 10 ml de méthanol R. Reprenez le résidu avec 50 ml de méthanol R. Traitez comme précédemment. Réunissez les filtrats et les solutions de rinçage dans une fiole jaugée de 200 ml et complétez à 200,0 ml avec du méthanol R. Introduisez 25,0 ml de la solution dans un ballon ; évaporez à siccité sous pression réduite. Reprenez le résidu avec la phase mobile, transvasez quantitativement dans une fiole jaugée de 100 ml et complétez à 100,0 ml avec la phase mobile.

« Solution témoin. Dans une fiole jaugée de 100 ml, dissolvez 0,030 g (m2) de caféine R dans la phase mobile et complétez à 100,0 ml avec le même solvant. Introduisez 10,0 ml de cette solution dans une fiole jaugée de 100 ml et complétez à 100,0 ml avec le même solvant.

« La chromatographie peut être réalisée en utilisant :

« - une colonne d'acier inoxydable d'une longueur de 0,25 m et d'un diamètre intérieur de 4,6 mm, remplie de gel de silice octadécylsilylé pour chromatographie R (5 mm) ;

« - comme phase mobile à un débit de 1 ml par minute, un mélange de 35 volumes de méthanol R et de 65 volumes d'eau R ;

« - comme détecteur, un spectrophotomètre réglé à 272 nm ;

« - un injecteur à boucle.

« Injectez des volumes appropriés de chaque solution.

« Calculez la teneur en caféine à l'aide de l'expression :

m2 x A1 x 80

m1 x A2

« A1 = aire du composé dans le chromatogramme obtenu avec la solution à examiner ;

« A2 = aire du composé dans le chromatogramme obtenu avec la solution témoin.

« Conservation

« En récipient bien fermé, à l'abri de la lumière. »