JORF n°85 du 10 avril 1990

Identification

A. - A 0,2ml de teinture d'orange amère, ajoutez 0,8ml d'alcool R puis 0,2 ml de la solution de chlorure d'aluminium R. Examinez en lumière ultraviolette à 365nm, il apparaît une coloration jaune vif, fluorescente.
B. - A 0,2 ml de teinture d'orange amère, ajoutez 0,8 ml d'alcool R puis 0,1 ml de solution de chlorure ferrique R2; il apparaît une coloration noire immédiate.
C. - Opérez par chromatographie sur couche mince (V.6.20.2) en utilisant une plaque recouverte de gel de silice GR.
Solution à examiner. - Teinture d'orange amère à examiner.
Solution témoin (a). - Agitez 5,0 mg d'hespéridine (1) avec 2 ml d'éthanol R, puis filtrez.
Solution témoin (b). - Dans une fiole jaugée de 20 ml, introduisez 5 mg de rutine R, dissolvez dans du méthanol R et complétez à 20 ml avec le même solvant.
Solution témoin (c). - Dans une fiole jaugée de 10 ml, introduisez 5 mg de scopolétol R, dissolvez dans du méthanol R et complétez à 10 ml avec le même solvant.
Déposez séparément sur la plaque 10 m l de la solution à examiner et des solutions témoins (a) et (b) et 1 m l de la solution témoin (c). Développez sur un parcours de 10 cm avec un mélange de 10 volumes d'eau distillée, de 10 volumes d'acide formique anhydre R, de 30 volumes de méthyléthylcétone R et de 50 volumes d'acétate d'éthyle R. Laissez sécher la plaque à l'air jusqu'à disparition de l'odeur des solvants. Pulvérisez de la solution de chlorure d'aluminium R. Chauffez la plaque à l'étuve à 100-105oC pendant 3 minutes.
Examinez en lumière ultraviolette à 365 nm. Le chromatogramme obtenu avec la solution à examiner présente une tache jaune et une tache orange semblables quant à leur position et leur coloration aux taches des chromatogrammes obtenus avec les solutions témoins (a) et (b). Il présente trois importantes taches violettes, situées au-dessous de ces deux taches, dont une est semblable quant à sa position à la tache bleue du chromatogramme obtenu avec la solution témoin (c). Il présente également une importante tache jaune verdâtre, située entre les taches correspondant à la rutine et à l'hespéridine. D'autres taches d'intensité plus faible sont visibles aux Rf voisins de 0,10 (jaunâtre), 0,15 (jaunâtre), 0,25 (violacée), 0,65 (jaunâtre) et 0,90 (bleue).

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B. - A 0,2 ml de teinture d'orange amère, ajoutez 0,8 ml d'alcool R puis 0,1 ml de solution de chlorure ferrique R2; il apparaît une coloration noire immédiate.

C. - Opérez par chromatographie sur couche mince (V.6.20.2) en utilisant une plaque recouverte de gel de silice GR.

Solution à examiner. - Teinture d'orange amère à examiner.

Solution témoin (a). - Agitez 5,0 mg d'hespéridine (1) avec 2 ml d'éthanol R, puis filtrez.

Solution témoin (b). - Dans une fiole jaugée de 20 ml, introduisez 5 mg de rutine R, dissolvez dans du méthanol R et complétez à 20 ml avec le même solvant.

Solution témoin (c). - Dans une fiole jaugée de 10 ml, introduisez 5 mg de scopolétol R, dissolvez dans du méthanol R et complétez à 10 ml avec le même solvant.

Déposez séparément sur la plaque 10 m l de la solution à examiner et des solutions témoins (a) et (b) et 1 m l de la solution témoin (c). Développez sur un parcours de 10 cm avec un mélange de 10 volumes d'eau distillée, de 10 volumes d'acide formique anhydre R, de 30 volumes de méthyléthylcétone R et de 50 volumes d'acétate d'éthyle R. Laissez sécher la plaque à l'air jusqu'à disparition de l'odeur des solvants. Pulvérisez de la solution de chlorure d'aluminium R. Chauffez la plaque à l'étuve à 100-105oC pendant 3 minutes.

Examinez en lumière ultraviolette à 365 nm. Le chromatogramme obtenu avec la solution à examiner présente une tache jaune et une tache orange semblables quant à leur position et leur coloration aux taches des chromatogrammes obtenus avec les solutions témoins (a) et (b). Il présente trois importantes taches violettes, situées au-dessous de ces deux taches, dont une est semblable quant à sa position à la tache bleue du chromatogramme obtenu avec la solution témoin (c). Il présente également une importante tache jaune verdâtre, située entre les taches correspondant à la rutine et à l'hespéridine. D'autres taches d'intensité plus faible sont visibles aux Rf voisins de 0,10 (jaunâtre), 0,15 (jaunâtre), 0,25 (violacée), 0,65 (jaunâtre) et 0,90 (bleue).