Art. 2. - Il est porté additions à la dixième édition de la Pharmacopée française pour les monographies :
« ACARIENS POUR PRODUITS ALLERGENES
« Définition
« Les acariens pour produits allergènes sont principalement représentés par la famille des Pyroglyphidae : Dermatophagoides pteronyssinus, Dermatophagoides farinae, Dermatophagoides microceras et Euroglyphus maynei, et par la famille des Acaridoidae : Glyciphagus domesticus, Lepidoglyphus destructor, Tyrophagus putrescentiae et Acarus siro. Les protéines allergisantes sont localisées au niveau du corps des acariens, allergènes somatiques, et de leurs fèces, allergènes métaboliques.
« Production
« La matière première utilisée pour la préparation des extraits allergènes est obtenue par culture de ces acariens sur des milieux appropriés. Ces milieux sont choisis pour leur faible allergénicité. L'emploi de milieux contenant des substances d'origine animale ou humaine doit être justifié. Les substances d'origine animale entrant dans la composition de ces milieux sont conformes à la monographie PRODUITS COMPORTANT UN RISQUE DE TRANSMISSION D'AGENTS D'ENCEPHALOPATHIES SPONGIFORMES ANIMALES de la Pharmacopée européenne (1483). Les milieux contenant des substances d'origine humaine doivent faire l'objet d'un traitement approprié permettant d'inactiver ou d'éliminer tout agent pathogène transmissible. Sont utilisés soit les cultures totales recueillies à maturité qui contiennent à la fois les allergènes somatiques et les allergènes métaboliques, soit les corps isolés qui contiennent principalement les allergènes somatiques.
« Caractères
« Les acariens pour produits allergènes se présentent sous la forme d'une poudre généralement brune, constituée dans le cas de cultures totales : de corps entiers, de débris de corps, d'oeufs, de larves, de fèces et de constituants des milieux de culture, et dans le cas de corps isolés : de corps entiers et de débris de corps.
« Identification
« Chaque espèce d'acariens pour produits allergènes est caractérisée par sa forme, la dimension de ses pattes, le nombre et la répartition de ses poils et, si nécessaire, la géométrie de ses stries dorsales.
« Préparez une lame dans les conditions décrites dans l'essai "Acariens étrangers". Les acariens pour produits allergènes examinés présentent les caractères microscopiques comparables à ceux de lames de référence ou de leurs représentations graphiques.
« Essai
« Solution S. Faites macérer 0,1 g d'acariens pour produits allergènes dans 2 ml d'eau, à une température de 2o C à 8o C sous agitation pendant 2 heures. Centrifugez puis filtrez sur des membranes de porosité décroissante jusqu'à 0,45 mm.
« Eléments étrangers. Les acariens pour produits allergènes constitués de corps isolés satisfont à l'essai "Eléments étrangers".
« Déposez 0,1 g d'acariens pour produits allergènes sur une lame dans de l'eau distillée R, puis recouvrez d'une lamelle. Examinez au microscope (x 20) en procédant à des balayages longitudinaux. Dans chaque champ, dénombrez toutes les particules (acariens et éléments étrangers) et continuez l'examen sur 8 à 10 champs optiques séparés. Les éléments étrangers peuvent être classés selon leur origine en : acariens étrangers ; poils ; particules. Les acariens pour produits allergènes constitués de corps isolés ne contiennent pas plus de 5 % d'éléments étrangers d'une taille supérieure ou égale à celle des acariens.
« Acariens étrangers. Introduisez 50 mg d'acariens pour produits allergènes dans un tube à essai de 5 ml et ajoutez 0,5 ml de réactif bleu acétique R. Agitez. Déposez une goutte sur une lame, puis recouvrez d'une lamelle. Examinez au microscope au grossissement approprié (x 320 par exemple) en procédant à des balayages longitudinaux. Examinez au moins 20 acariens : vérifiez l'absence d'acariens d'autres espèces en comparaison avec les lames de référence ou les représentations graphiques. Si l'examen est rendu difficile par la présence de milieu de culture, recommencer l'examen après décantation de quelques heures du mélange d'acariens et de réactif bleu acétique.
« Profil protéique. Utilisez une solution préparée dans les mêmes conditions que la solution S en faisant macérer 0,1 g d'acariens pour produits allergènes dans 1 ml d'eau. Opérez par isoélectrofocalisation sur gel de polyacrylamide à 3 % (V.6.21.A) en utilisant un mélange d'ampholytes d'un pH compris entre 3,5 et 9,5. Réglez le voltage à 100 V/cm environ sans dépasser une intensité de 50 mA. Arrêtez la migration après 90 minutes. Fixez. Colorez avec la solution de bleu de Coomassie R puis lavez. Comparez le profil obtenu à celui d'un extrait de référence.
« Les essais suivants doivent être mis en oeuvre sur les extraits à l'étape la plus tardive possible du processus de fabrication. Ces essais ne sont pas applicables à tous les acariens pour produits allergènes, notamment en raison de l'absence des réactifs correspondants.
« Allergènes individuels. La teneur en allergènes individuels, déterminée par une méthode appropriée, est comprise entre 50 % et 200 % de la valeur déclarée.
« Activité allergénique totale. Dans les cas appropriés, l'activité est déterminée par la méthode de l'inhibition de la capacité de fixation des immunoglobulines E spécifiques sur une phase solide par comparaison avec un extrait de référence. Opérez sur la solution S.
« Conservation
« Conservez les acariens lyophilisés ou non dans un récipient étanche à une température maximale de + 8 oC. Les acariens peuvent être congelés. Avant utilisation, laissez la température du récipient se rééquilibrer pendant 2 heures à température ambiante.
« Etiquetage
« L'étiquette indique la dénomination scientifique latine de l'espèce, le numéro de lot, les conditions de conservation.
« Réactif
« Bleu acétique (réactif). Dans une fiole de 100 ml, introduisez 0,1 g de bleu de méthylène R, 20 ml d'éthanol R et 50 ml d'acide acétique glacial R puis complétez à 100 ml avec de l'eau R. Agitez jusqu'à totale dissolution puis filtrez.
« AGARICUS BULBOSUS
POUR PREPARATIONS HOMEOPATHIQUES
« Autre dénomination homéopathique : Amanita phalloides.
« Définition
« La drogue Agaricus bulbosus est constituée par le champignon entier frais (carpophore) Amanita phalloides (Vaill. ex Fr.) Link.
« Caractères
« Agaricus bulbosus présente les caractères macroscopiques décrits en identification.
« Examinées au microscope, les spores sont blanches en masse, courtement elliptiques, mais pas tout à fait rondes. Elles mesurent 8 mm à 11 mm de long et 7 mm à 9 mm de large, leur contenu est amyloïde. L'odeur est nulle, mais peut devenir vireuse chez les échantillons vieillissants.
« Identification
« Le chapeau d'Amanita phalloides (Vaill. ex Fr.) Link est charnu, d'abord arrondi, puis convexe et enfin étalé, à marge lisse, de couleur vert jaunâtre, mais assez variable, parfois pâle ou plus foncé ; il présente souvent des vergetures radiales plus foncées. Les lames, assez serrées, inégales, obtuses en avant, sont blanches. Le pied cylindrique, bulbeux, peut atteindre 15 cm de hauteur et 1 cm à 2 cm de diamètre ; il est souvent tigré de zigzags satinés. La volve, en forme de sac, est blanche à l'extérieur, souvent verdâtre à l'intérieur. L'anneau est blanc, membraneux. La chair est blanche.
« SOUCHE
« Définition
« La teinture mère d'Agaricus bulbosus est préparée à la teneur en éthanol de 45 % V/V, à partir du champignon entier frais Amanita phalloides (Vaill. ex Fr.) Link, selon la technique de préparation des teintures mères au 1/20 (voir la monographie PREPARATIONS HOMEOPATHIQUES). Elle contient de 0,01 à 0,06 g/l d'a-amanitine (C39H54N10O14S ; Mr 919).
« Caractères
« Liquide jaune-brun à vert.
« Identification
« A. - Opérez par chromatographie sur couche mince (2.2.27) en utilisant une plaque recouverte d'un gel de silice approprié.
« Solution à examiner. Teinture mère d'Agaricus bulbosus à examiner.
« Solution témoin. Dissolvez 10 mg de proline R et 10 mg de thréonine R dans 5 ml d'eau R et complétez à 10 ml avec de l'alcool R.
« Déposez séparément sur la plaque, en bandes, 40 ml de la solution à examiner et 5 ml de la solution témoin. Développez sur un parcours de 10 cm avec un mélange de 10 volumes d'acide acétique glacial R, de 20 volumes d'eau R, de 35 volumes d'acétone R et de 35 volumes de butanol R. Laissez sécher la plaque à l'air. Pulvérisez une solution d'isatine R à 2 g/l dans un mélange de 5 volumes d'acide acétique glacial R et de 95 volumes de butanol R. Chauffez la plaque à 100-105 oC pendant 10 minutes. Examinez à la lumière du jour. Le chromatogramme obtenu avec la solution à examiner présente une bande bleu-violet plus ou moins intense de Rf voisin de 0,30 (proline) et une bande rosée de Rf voisin de 0,40 (thréonine) semblables quant à leur position et leur coloration aux bandes principales du chromatogramme obtenu avec la solution témoin.
« B. - Opérez par chromatographie sur couche mince (2.2.27) en utilisant une plaque recouverte d'un gel de silice approprié.
« Solution à examiner. Teinture mère d'Agaricus bulbosus à examiner.
« Solution témoin. Dissolvez 1 mg d'-amanitine R dans du méthanol R et complétez à 2,0 ml avec le même solvant.
« Déposez séparément sur la plaque, en bandes, 40 ml de la solution à examiner et 10 ml de la solution témoin. Développez sur un parcours de 10 cm avec un mélange de 4 volumes d'acide acétique glacial R, de 6 volumes d'eau R, de 30 volumes de méthanol R et de 60 volumes de chloroforme R. Laissez sécher la plaque à l'air. Pulvérisez une solution d'aldéhyde cinnamique R à 5 % V/V dans le méthanol R, puis exposez la plaque aux vapeurs d'acide chlorhydrique R pendant 30 minutes. Examinez à la lumière du jour. Le chromatogramme obtenu avec la solution à examiner présente une bande rose de Rf voisin de 0,35 semblable quant à sa position et sa coloration à la bande du chromatogramme obtenu avec la solution témoin. Il présente également une bande jaune orangé de Rf voisin de 0,10 et une bande jaune orangé de Rf voisin de 0,40.
« Essai
« Teneur en éthanol (2.9.10). La teneur en éthanol est comprise entre 40 % V/V et 50 % V/V.
« Résidu sec. Le résidu sec (voir la monographie PREPARATIONS HOMEOPATHIQUES) est supérieur ou égal à 0,80 %.
« Dosage
« Opérez par chromatographie liquide (2.2.29).
« Solution à examiner. Teinture mère d'Agaricus bulbosus à examiner.
« Solution témoin. Dissolvez 1,0 mg d'a-amanitine R dans du méthanol R et complétez à 25,0 ml avec le même solvant.
« La chromatographie peut être réalisée en utilisant :
« - une colonne d'acier inoxydable d'une longueur de 0,25 m et d'un diamètre intérieur de 4 mm, remplie de gel de silice octadécylsilylé pour chromatographie R (5 mm) ;
« - comme phase mobile, à un débit de 1 ml par minute, un mélange de 25 volumes de méthanol R et de 75 volumes d'eau R ;
« - comme détecteur, un spectrophotomètre réglé à 303 nm ;
« - un injecteur à boucle.
« Injectez 10 ml de chaque solution.
« Calculez la teneur % en -amanitine à l'aide de l'expression :
A2 x m x 4
A1
« A1 = surface du pic correspondant à l'a-amanitine dans le chromatogramme obtenu avec la solution témoin ;
« A2 = surface du pic correspondant à l'a-amanitine dans le chromatogramme obtenu avec la solution à examiner ;
« m = masse d'a-amanitine dans la solution témoin, en gramme.
« Réactif
a-amanitine (C39H54N10O14S ; Mr 919).
« F : 254 oC à 255 oC avec décomposition.
« a20 : + 1910.
D
« Très toxique. »
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