Etiquetage

L'étiquette du récipient et celle de l'emballage indiquent:
- dans le cas d'un produit liquide, le volume de préparation dans le récipient et la teneur en protéines exprimé en grammes par litre;
- dans le cas d'un produit cryodesséché, la quantité de protéines dans le récipient;
- la quantité d'immunoglobuline dans le récipient;
- la voie d'administration;
- les conditions de conservation;
- la date de péremption.
L'étiquette de l'emballage ou la notice jointe indique:
- dans le cas du produit cryodesséché, le nom ou la composition et le volume du liquide à ajouter;
- la distribution des sous-classes d'immunoglobuline G dans la préparation; - dans les cas appropriés, la quantité d'albumine ajoutée comme stabilisant; - la teneur maximale en immunoglobuline A.

VII.1.1. REACTIFS

Phosphate disodique dihydraté. Voir la monographie Dinatrii phosphas dihydricus.
Phosphate monosodique monohydraté. - NaH2PO4, H2O (Mr 138,0).
Silice (gel de) hydrophile pour chromatographie. Gel de silice de granulométrie très fine (3-10 ,m) et dont la surface a été traitée afin de la rendre hydrophile. La taille des particules peut être indiquée après le nom du réactif dans les essais où il est utilisé.
Poudre blanche, fine, homogène, pratiquement insoluble dans l'eau, dans l'alcool et dans le chloroforme.

V.2.1.11. ACTIVATEUR DE PREKALLIKREINE

L'activateur de la prékallikréine (PKA) transforme la prékallikréine en kallikréine et il peut être titré par sa capacité de scinder un chromophore d'un substrat peptidique synthétique, la vitesse de la réaction étant déterminée par spectrophotométrie et la concentration en PKA étant calculée par comparaison à une préparation de référence étalonnée en unités internationales.
L'unité internationale correspond à l'activité d'une quantité donnée de l'Etalon international qui est constitué par de l'activateur de prékallikréine cryodesséchée (1) .
Préparation du substrat de prékallikréine.
Pour éviter une activation par la coagulation, le sang ou le plasma employés pour la préparation de la prékallikréine ne doivent être mis en contact qu'avec de la matière plastique ou du verre siliconé.
Prélevez 9 volumes de sang humain sur 1 volume de solution anticoagulante (ACD, CPD ou une solution à 3,8 p. 100 m/V de citrate sodique R) additionnée de 1 mg par millilitre de bromure d'hexadiméthrine R. Centrifugez à 3 600 g pendant 5 minutes. Séparez le plasma et centrifugez à 6 000 g pendant 20 minutes pour séparer les plaquettes. Séparez le plasma pauvre en plaquettes et procédez à la dialyse contre 10 volumes de solution tampon A pendant 20 heures. Après dialyse, déposez le plasma sur une colonne chromatographique contenant 2 fois son volume d'agarose-DEAE pour chromatographie à échange d'ions R qui a été équilibré dans la solution tampon A. Procédez à l'élution au moyen de la solution tampon A à un débit de 20 ml/cm2/h. Recueillez l'éluat par fractions et enregistrez l'absorbance à 280 nm (V.6.19).
Réunissez les fractions qui contiennent le premier pic de protéines pour obtenir un volume 1,2 fois environ celui du plasma pauvre en plaquettes.
Afin de vérifier que le substrat est exempt d'activité kallikréine, mélangez 1 volume avec 20 volumes de la solution de substrat chromogène qui sera utilisé dans le titrage, préalablement chauffée à 37 oC et maintenez le mélange à 37 oC pendant 2 minutes. Le substrat est approprié si l'absorbance n'augmente pas de plus de 0,001 par minute. Ajoutez à la solution de substrat 7 g par litre de chlorure de sodium R et filtrez sur une membrane (porosité 0,45 ,m). Congelez le filtrat en parties aliquotes et conservez à - 25 oC; le filtrat peut également être cryodesséché avant la conservation.
Effectuez les opérations depuis la chromatographie jusqu'à la congélation en parties aliquotes pendant une seule journée de travail.