JORF n°146 du 25 juin 1994

Essai

Détermination du pH (V.6.3.1). Dissolvez 50 mg de chlorhydrate de doxorubicine dans de l'eau exempte de dioxyde de carbone R et complétez à 10 ml avec le même solvant. Le pH de la solution est de 4,0 à 5,5.
Substances apparentées. Opérez par chromatographie sur couche mince (V.6.20.2) en utilisant une plaque recouverte de gel de silice H R.
Solution à examiner (a). Dissolvez 50 mg de chlorhydrate de doxorubicine dans 1 ml d'eau et complétez à 5 ml avec du méthanol R.
Solution à examiner (b). Prélevez 1 ml de solution à examiner (a) et complétez à 5 ml avec un mélange de 10 volumes d'eau et de 90 volumes de méthanol R.
Solution témoin (a). Dissolvez 10 mg de chlorhydrate de doxorubicine SCR dans un mélange de 10 volumes d'eau et de 90 volumes de méthanol R et complétez à 5 ml avec le même mélange de solvants.
Solution témoin (b). Dissolvez 10 mg de chlorhydrate de daunorubicine SCR dans un mélange de 10 volumes d'eau et de 90 volumes de méthanol R et complétez à 5 ml avec le même mélange de solvants.
Solution témoin (c). Dissolvez 5 mg d'aglycone de doxorubicine SCR (doxorubicinone) dans du chlorure de méthylène R et complétez à 100 ml avec le même solvant.
Solution témoin (d). Prélevez 1 ml de solution témoin (a) et complétez à 40 ml avec du méthanol R.
Déposez séparément sur la plaque, en bandes de 5 mm, 10 ,l de chaque solution. Développez dans une cuve non saturée, sur un parcours de 15 cm,
avec un mélange de 1 volume d'eau, de 2 volumes d'acide formique anhydre R,
de 15 volumes de méthanol R et de 82 volumes de chlorure de méthylène R.
Laissez sécher la plaque à l'air et examinez immédiatement. S'il apparaît une tache correspondant à l'aglycone de doxorubicine dans le chromatogramme obtenu avec la solution à examiner (a), elle n'est pas plus intense que la tache principale du chromatogramme obtenu avec la solution témoin (c). S'il apparaît d'autres taches que la tache principale et les taches correspondant à l'aglycone de doxorubicine dans le chromatogramme obtenu avec la solution à examiner (a), aucune d'entre elles n'est plus intense que la tache principale du chromatogramme obtenu avec la solution témoin (d).
Acétone et éthanol. Opérez par chromatographie en phase gazeuse (V.6.20.3) en utilisant le dioxanne R comme étalon interne.
Solution à examiner. Dissolvez 50 mg de chlorhydrate de doxorubicine dans 1,0 ml d'eau contenant 0,1 p. 100 m/V de dioxanne R.
Solution témoin. Mélangez 0,50 g d'éthanol R, 0,50 g d'acétone R et 1,00 g de dioxanne R et complétez à 100 ml avec de l'eau. Prélevez 10 ml de cette solution et complétez à 100 ml avec de l'eau.
La chromatographie peut être effectuée en utilisant :
- une colonne de verre d'une longueur de 2 m et d'un diamètre intérieur de 3 mm, remplie de terre d'infusoires pour chromatographie R1, imprégnée de 10 p. 100 m/m de polyéthylèneglycol 20 000 R;
- comme gaz vecteur de l'azote pour chromatographie R;
- un détecteur à ionisation de flamme,
en maintenant la température de la colonne à 70 oC, celle de la chambre à injection et celle du détecteur à 125 oC.
- Injectez 1 ,l de chaque solution.
La teneur totale en acétone et en éthanol n'est pas supérieure à 2,0 p. 100 m/m, dont 0,5 p. 100 d'acétone au maximum.
Teneur en eau (V.3.5.6). Déterminée par semi-microdosage sur 0,100 g de chlorhydrate de doxorubicine, la teneur en eau n'est pas supérieure à 4,0 p. 100.
Histamine (V.2.1.6). Effectuez l'essai de façon que la concentration en chlorhydrate de doxorubicine dans le bain à organes ne dépasse pas 100 mg par litre. Le chlorhydrate de doxorubicine ne contient pas plus de 100 ,g de substances histaminiques (calculées en dichlorhydrate d'histamine) par gramme.

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Essai

Substances apparentées. Opérez par chromatographie sur couche mince (V.6.20.2) en utilisant une plaque recouverte de gel de silice H R.

Solution à examiner (a). Dissolvez 50 mg de chlorhydrate de doxorubicine dans 1 ml d'eau et complétez à 5 ml avec du méthanol R.

Solution à examiner (b). Prélevez 1 ml de solution à examiner (a) et complétez à 5 ml avec un mélange de 10 volumes d'eau et de 90 volumes de méthanol R.

Solution témoin (a). Dissolvez 10 mg de chlorhydrate de doxorubicine SCR dans un mélange de 10 volumes d'eau et de 90 volumes de méthanol R et complétez à 5 ml avec le même mélange de solvants.

Solution témoin (b). Dissolvez 10 mg de chlorhydrate de daunorubicine SCR dans un mélange de 10 volumes d'eau et de 90 volumes de méthanol R et complétez à 5 ml avec le même mélange de solvants.

Solution témoin (c). Dissolvez 5 mg d'aglycone de doxorubicine SCR (doxorubicinone) dans du chlorure de méthylène R et complétez à 100 ml avec le même solvant.

Solution témoin (d). Prélevez 1 ml de solution témoin (a) et complétez à 40 ml avec du méthanol R.

Déposez séparément sur la plaque, en bandes de 5 mm, 10 ,l de chaque solution. Développez dans une cuve non saturée, sur un parcours de 15 cm,

avec un mélange de 1 volume d'eau, de 2 volumes d'acide formique anhydre R,

de 15 volumes de méthanol R et de 82 volumes de chlorure de méthylène R.

Laissez sécher la plaque à l'air et examinez immédiatement. S'il apparaît une tache correspondant à l'aglycone de doxorubicine dans le chromatogramme obtenu avec la solution à examiner (a), elle n'est pas plus intense que la tache principale du chromatogramme obtenu avec la solution témoin (c). S'il apparaît d'autres taches que la tache principale et les taches correspondant à l'aglycone de doxorubicine dans le chromatogramme obtenu avec la solution à examiner (a), aucune d'entre elles n'est plus intense que la tache principale du chromatogramme obtenu avec la solution témoin (d).

Acétone et éthanol. Opérez par chromatographie en phase gazeuse (V.6.20.3) en utilisant le dioxanne R comme étalon interne.

Solution à examiner. Dissolvez 50 mg de chlorhydrate de doxorubicine dans 1,0 ml d'eau contenant 0,1 p. 100 m/V de dioxanne R.

Solution témoin. Mélangez 0,50 g d'éthanol R, 0,50 g d'acétone R et 1,00 g de dioxanne R et complétez à 100 ml avec de l'eau. Prélevez 10 ml de cette solution et complétez à 100 ml avec de l'eau.

La chromatographie peut être effectuée en utilisant :

- une colonne de verre d'une longueur de 2 m et d'un diamètre intérieur de 3 mm, remplie de terre d'infusoires pour chromatographie R1, imprégnée de 10 p. 100 m/m de polyéthylèneglycol 20 000 R;

- comme gaz vecteur de l'azote pour chromatographie R;

- un détecteur à ionisation de flamme,

en maintenant la température de la colonne à 70 oC, celle de la chambre à injection et celle du détecteur à 125 oC.

- Injectez 1 ,l de chaque solution.

La teneur totale en acétone et en éthanol n'est pas supérieure à 2,0 p. 100 m/m, dont 0,5 p. 100 d'acétone au maximum.

Teneur en eau (V.3.5.6). Déterminée par semi-microdosage sur 0,100 g de chlorhydrate de doxorubicine, la teneur en eau n'est pas supérieure à 4,0 p. 100.

Histamine (V.2.1.6). Effectuez l'essai de façon que la concentration en chlorhydrate de doxorubicine dans le bain à organes ne dépasse pas 100 mg par litre. Le chlorhydrate de doxorubicine ne contient pas plus de 100 ,g de substances histaminiques (calculées en dichlorhydrate d'histamine) par gramme.