Mode opératoire

Standardisation de la solution d'érythrocytes de mouton à 5 p. 100. Séparez les érythrocytes de mouton par centrifugation d'un volume approprié du sang de mouton stabilisé ; lavez les cellules 3 fois au moins avec la solution tampon gélatine-barbital et préparez une suspension à 5 p. 100 V/V dans la solution tampon gélatine-barbital. Déterminez la concentration cellulaire par la méthode suivante. Ajoutez 0,2 ml de la suspension à 2,8 ml d'eau et centrifugez le lysat pendant 5 minutes à 1 000 g. La concentration cellulaire est appropriée si l'absorbance (V.6.19) du liquide surnageant déterminée à 541 nm est de 0,62 0,01. Corrigez la concentration cellulaire par addition de solution tampon gélatine-barbital selon la formule :

Vf Vi x A

Vi x A

Vf =

0,62

Vf = volume final,
Vi = volume initial,
A = absorbance déterminée à 541 nm pour la suspension d'origine.
Après ajustement, la suspension contient environ 1 x 109 cellules par millilitre.
Titrage de l'hémolysine Préparez des dilutions d'hémolysine selon le schéma du tableau 1.