JORF n°146 du 25 juin 1994

Essai

Solubilité. Dans le cas d'une préparation cryodesséchée, ajoutez le volume du liquide indiqué sur l'étiquette. La préparation se dissout complètement en 20 minutes à 20-25 oC.
Détermination du pH (V.6.3.1). Diluez l'immunoglobuline humaine normale dans une solution de chlorure de sodium R à 0,9 p. 100 m/V jusqu'à une concentration de 1 p. 100 m/V en protéines. Le pH de la solution est de 6,4 à 7,2.
Protéines totales. Diluez l'immunoglobuline humaine normale dans une solution de chlorure de sodium R à 0,9 p. 100 m/V pour obtenir une solution contenant 15 mg environ de protéines dans 2 ml. Dans un tube à centrifugation à fond rond, introduisez 2 ml de cette solution. Ajoutez 2 ml d'une solution de molybdate de sodium R à 7,5 p. 100 m/V et 2 ml d'un mélange de 1 volume d'acide sulfurique exempt d'azote R et de 30 volumes d'eau. Agitez,
centrifugez pendant 5 minutes, décantez le liquide surnageant et laissez égoutter le tube renversé sur du papier filtre. Effectuez le dosage de l'azote dans le culot après minéralisation par l'acide sulfurique (V.3.5.2). Calculez la teneur en protéines en multipliant la quantité d'azote par 6,25. La teneur en protéines n'est pas inférieure à 10 p. 100 m/V ni supérieure à 18 p. 100 m/V. Elle n'est pas inférieure à 90 p. 100 ni supérieure à 110 p.
100 de la quantité indiquée sur l'étiquette.
Composition en protéines. Opérez par électrophorèse de zone (V.6.21) en utilisant comme support des bandelettes de gel d'acétate de cellulose approprié et comme solution d'électrolyte la solution tampon barbital pH 8,6 R1.
Solution à examiner. Diluez l'immunoglobuline humaine normale dans une solution de chlorure de sodium R à 0,9 p. 100 m/V jusqu'à une concentration de 5 p. 100 m/V en protéines.
Solution témoin. Reconstituez l'immunoglobuline humaine pour électrophorèse PBR et diluez-la dans une solution de chlorure de sodium R à 0,9 p. 100 m/V jusqu'à une concentration de 5 p. 100 m/V en protéines.
Déposez sur une bandelette 2,5 ,l de solution à examiner en bande de 10 mm ou déposez 0,25 ,l par millimètre si une bandelette plus étroite est utilisée. Sur une autre bandelette, déposez dans les mêmes conditions le même volume de solution témoin. Appliquez un champ électrique approprié tel que la bande de l'albumine du sérum humain normal dans un électrophorégramme témoin migre de 30 mm au moins. Traitez les bandelettes avec de la solution de noir amido 10B R pendant 5 minutes, puis avec un mélange de 10 volumes d'acide acétique glacial R et de 90 volumes de méthanol R pendant le temps strictement nécessaire pour obtenir la décoloration du support. Développez la transparence du support avec un mélange de 19 volumes d'acide acétique glacial R et de 81 volumes de méthanol R. Mesurez l'absorbance des bandes à 600 nm à l'aide d'un instrument ayant à cette longueur d'onde une réponse linéaire sur l'intervalle de mesure. Effectuez 3 fois la mesure sur chaque bandelette et calculez la moyenne des lectures sur chaque bandelette. Dans l'électrophorégramme obtenu avec la solution à examiner, 10 p. 100 au plus des protéines ont une mobilité différente de celle de la bande principale.
L'essai n'est valable que si, dans l'électrophorégramme obtenu avec la solution témoin, la proportion de protéines contenues dans la bande principale est dans les limites indiquées dans la notice accompagnant la préparation de référence.
Distribution de la taille moléculaire. Examinez par chromatographie liquide (V.6.20.4).
Solution à examiner. Diluez la préparation à examiner dans une solution de chlorure de sodium R à 0,9 p. 100 m/V jusqu'à une concentration appropriée au système chromatographique utilisé. Une concentration entre 4 g/l et 12 g/l et l'injection de 50 ,g à 600 ,g de protéine conviennent généralement.
Solution témoin. Diluez l'immunoglobuline humaine PBR dans une solution de chlorure de sodium R à 0,9 p. 100 m/V pour obtenir la même concentration en protéines que dans la solution à examiner.
La chromatographie peut être réalisée en utilisant :
- une colonne d'une longueur de 0,6 m et d'un diamètre intérieur de 7,5 mm, remplie de gel de silice hydrophile pour chromatographie R;
- comme phase mobile, à un débit de 0,5 ml par minute, une solution contenant par litre : 4,873 g de phosphate disodique dihydraté R, 1,741 g de phosphate monosodique monohydraté R, 11,688 g de chlorure de sodium R et 50 mg d'azide de sodium R;
- comme détecteur, un spectrophotomètre réglé à 280 nm.
Dans le chromatogramme obtenu avec la solution témoin, le pic principal correspond à l'IgG monomère et il apparaît un pic correspondant au dimère à un temps de rétention relatif au monomère de 0,85 environ. Identifiez les pics dans le chromatogramme obtenu avec la solution à examiner par comparaison au chromatogramme obtenu avec la solution témoin ; les pics ayant un temps de rétention plus petit que celui du dimère correspondent aux polymères et aux agrégats. La préparation à examiner satisfait à l'essai si dans le chromatogramme obtenu avec la solution à examiner :
- le temps de rétention par rapport au pic correspondant dans le chromatogramme obtenu avec la solution témoin est de 1 0,02 pour le monomère et pour le dimère;
- la somme du monomère et du dimère représente 85 p. 100 au minimum de la surface totale du chromatogramme et les polymères et agrégats représentent 10 p. 100 au maximum de la surface totale.
Teneur en eau (V.3.5.6). Déterminée par semi-microdosage sur 0,500 g d'immunoglobuline humaine normale, la teneur en eau d'une préparation cryodesséchée n'est pas supérieure à 3,0 p. 100.
Stérilité (V.2.1.1). L'immunoglobuline humaine normale satisfait à l'essai de stérilité.
Pyrogènes (V.2.1.4). L'immunoglobuline humaine normale satisfait à l'essai des pyrogènes. Injectez à chaque lapin, par kilogramme de masse corporelle, 1 ml de la préparation à examiner.
Anticorps contre l'antigène de surface de l'hépatite B. Le taux d'anticorps contre l'antigène de surface de l'hépatite B de l'immunoglobuline humaine normale, déterminé par une méthode immunochimique appropriée (V.2.1.10),
n'est pas inférieur à 0,5 U.I. par gramme d'immunoglobuline.
L'immunoglobuline humaine normale destinée à être utilisée dans la prophylaxie de l'hépatite A satisfait également à l'essai suivant :
Anticorps contre le virus de l'hépatite A. Déterminez le taux d'anticorps contre le virus de l'hépatite A par comparaison avec une préparation de référence étalonnée en unités internationales, à l'aide d'un immunodosage de sensibilité et de spécificité appropriées (V.2.1.10).
L'unité internationale correspond à l'activité d'une quantité donnée de la préparation de référence internationale (2) d'immunoglobuline de l'hépatite A.
L'activité indiquée n'est pas inférieure à 100 U.I. par millilitre.
L'activité mesurée n'est pas inférieure à l'activité indiquée. Les limites de confiance (P = 0,95) de l'activité mesurée ne sont pas inférieures à 80 p.
100 ni supérieures à 125 p. 100.

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Version 1

Essai

Solubilité. Dans le cas d'une préparation cryodesséchée, ajoutez le volume du liquide indiqué sur l'étiquette. La préparation se dissout complètement en 20 minutes à 20-25 oC.

Détermination du pH (V.6.3.1). Diluez l'immunoglobuline humaine normale dans une solution de chlorure de sodium R à 0,9 p. 100 m/V jusqu'à une concentration de 1 p. 100 m/V en protéines. Le pH de la solution est de 6,4 à 7,2.

Protéines totales. Diluez l'immunoglobuline humaine normale dans une solution de chlorure de sodium R à 0,9 p. 100 m/V pour obtenir une solution contenant 15 mg environ de protéines dans 2 ml. Dans un tube à centrifugation à fond rond, introduisez 2 ml de cette solution. Ajoutez 2 ml d'une solution de molybdate de sodium R à 7,5 p. 100 m/V et 2 ml d'un mélange de 1 volume d'acide sulfurique exempt d'azote R et de 30 volumes d'eau. Agitez,

centrifugez pendant 5 minutes, décantez le liquide surnageant et laissez égoutter le tube renversé sur du papier filtre. Effectuez le dosage de l'azote dans le culot après minéralisation par l'acide sulfurique (V.3.5.2). Calculez la teneur en protéines en multipliant la quantité d'azote par 6,25. La teneur en protéines n'est pas inférieure à 10 p. 100 m/V ni supérieure à 18 p. 100 m/V. Elle n'est pas inférieure à 90 p. 100 ni supérieure à 110 p.

100 de la quantité indiquée sur l'étiquette.

Composition en protéines. Opérez par électrophorèse de zone (V.6.21) en utilisant comme support des bandelettes de gel d'acétate de cellulose approprié et comme solution d'électrolyte la solution tampon barbital pH 8,6 R1.

Solution à examiner. Diluez l'immunoglobuline humaine normale dans une solution de chlorure de sodium R à 0,9 p. 100 m/V jusqu'à une concentration de 5 p. 100 m/V en protéines.

Solution témoin. Reconstituez l'immunoglobuline humaine pour électrophorèse PBR et diluez-la dans une solution de chlorure de sodium R à 0,9 p. 100 m/V jusqu'à une concentration de 5 p. 100 m/V en protéines.

Déposez sur une bandelette 2,5 ,l de solution à examiner en bande de 10 mm ou déposez 0,25 ,l par millimètre si une bandelette plus étroite est utilisée. Sur une autre bandelette, déposez dans les mêmes conditions le même volume de solution témoin. Appliquez un champ électrique approprié tel que la bande de l'albumine du sérum humain normal dans un électrophorégramme témoin migre de 30 mm au moins. Traitez les bandelettes avec de la solution de noir amido 10B R pendant 5 minutes, puis avec un mélange de 10 volumes d'acide acétique glacial R et de 90 volumes de méthanol R pendant le temps strictement nécessaire pour obtenir la décoloration du support. Développez la transparence du support avec un mélange de 19 volumes d'acide acétique glacial R et de 81 volumes de méthanol R. Mesurez l'absorbance des bandes à 600 nm à l'aide d'un instrument ayant à cette longueur d'onde une réponse linéaire sur l'intervalle de mesure. Effectuez 3 fois la mesure sur chaque bandelette et calculez la moyenne des lectures sur chaque bandelette. Dans l'électrophorégramme obtenu avec la solution à examiner, 10 p. 100 au plus des protéines ont une mobilité différente de celle de la bande principale.

L'essai n'est valable que si, dans l'électrophorégramme obtenu avec la solution témoin, la proportion de protéines contenues dans la bande principale est dans les limites indiquées dans la notice accompagnant la préparation de référence.

Distribution de la taille moléculaire. Examinez par chromatographie liquide (V.6.20.4).

Solution à examiner. Diluez la préparation à examiner dans une solution de chlorure de sodium R à 0,9 p. 100 m/V jusqu'à une concentration appropriée au système chromatographique utilisé. Une concentration entre 4 g/l et 12 g/l et l'injection de 50 ,g à 600 ,g de protéine conviennent généralement.

Solution témoin. Diluez l'immunoglobuline humaine PBR dans une solution de chlorure de sodium R à 0,9 p. 100 m/V pour obtenir la même concentration en protéines que dans la solution à examiner.

La chromatographie peut être réalisée en utilisant :

- une colonne d'une longueur de 0,6 m et d'un diamètre intérieur de 7,5 mm, remplie de gel de silice hydrophile pour chromatographie R;

- comme phase mobile, à un débit de 0,5 ml par minute, une solution contenant par litre : 4,873 g de phosphate disodique dihydraté R, 1,741 g de phosphate monosodique monohydraté R, 11,688 g de chlorure de sodium R et 50 mg d'azide de sodium R;

- comme détecteur, un spectrophotomètre réglé à 280 nm.

Dans le chromatogramme obtenu avec la solution témoin, le pic principal correspond à l'IgG monomère et il apparaît un pic correspondant au dimère à un temps de rétention relatif au monomère de 0,85 environ. Identifiez les pics dans le chromatogramme obtenu avec la solution à examiner par comparaison au chromatogramme obtenu avec la solution témoin ; les pics ayant un temps de rétention plus petit que celui du dimère correspondent aux polymères et aux agrégats. La préparation à examiner satisfait à l'essai si dans le chromatogramme obtenu avec la solution à examiner :

- le temps de rétention par rapport au pic correspondant dans le chromatogramme obtenu avec la solution témoin est de 1 0,02 pour le monomère et pour le dimère;

- la somme du monomère et du dimère représente 85 p. 100 au minimum de la surface totale du chromatogramme et les polymères et agrégats représentent 10 p. 100 au maximum de la surface totale.

Teneur en eau (V.3.5.6). Déterminée par semi-microdosage sur 0,500 g d'immunoglobuline humaine normale, la teneur en eau d'une préparation cryodesséchée n'est pas supérieure à 3,0 p. 100.

Stérilité (V.2.1.1). L'immunoglobuline humaine normale satisfait à l'essai de stérilité.

Pyrogènes (V.2.1.4). L'immunoglobuline humaine normale satisfait à l'essai des pyrogènes. Injectez à chaque lapin, par kilogramme de masse corporelle, 1 ml de la préparation à examiner.

Anticorps contre l'antigène de surface de l'hépatite B. Le taux d'anticorps contre l'antigène de surface de l'hépatite B de l'immunoglobuline humaine normale, déterminé par une méthode immunochimique appropriée (V.2.1.10),

n'est pas inférieur à 0,5 U.I. par gramme d'immunoglobuline.

L'immunoglobuline humaine normale destinée à être utilisée dans la prophylaxie de l'hépatite A satisfait également à l'essai suivant :

Anticorps contre le virus de l'hépatite A. Déterminez le taux d'anticorps contre le virus de l'hépatite A par comparaison avec une préparation de référence étalonnée en unités internationales, à l'aide d'un immunodosage de sensibilité et de spécificité appropriées (V.2.1.10).

L'unité internationale correspond à l'activité d'une quantité donnée de la préparation de référence internationale (2) d'immunoglobuline de l'hépatite A.

L'activité indiquée n'est pas inférieure à 100 U.I. par millilitre.

L'activité mesurée n'est pas inférieure à l'activité indiquée. Les limites de confiance (P = 0,95) de l'activité mesurée ne sont pas inférieures à 80 p.

100 ni supérieures à 125 p. 100.